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人Elisa試劑盒與溫度的關(guān)系要弄清

更新時(shí)間：2015-03-03   點(diǎn)擊次數(shù)：1418次
 　　人Elisa試劑盒繼50年代的免疫熒光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后，在70年代初期又建立了用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。由于酶的生物催化作用，一個(gè)酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生了放大作用，人Elisa試劑盒使得原來極其微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識(shí)別出來，這種技術(shù)被稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相繼分別報(bào)道后，現(xiàn)已引起廣泛重視。人Elisa試劑盒是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。人Elisa試劑盒本法不僅可以用來測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。
　　因此人Elisa試劑盒在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，可概括四個(gè)方面：
　　1.免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
　　2.研究抗酶抗體的合成。
　　3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
　　4.定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。
　　人Elisa試劑盒濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至劃定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如斯。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在人Elisa試劑盒中似不恰當(dāng)。這就是為什么ELISA反應(yīng)老是需要一定時(shí)間的溫育。為加速反應(yīng)，可進(jìn)步反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。人Elisa試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。
　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法以其靈敏度高(可達(dá) ng 甚至pg 水平)，特異性好等優(yōu)點(diǎn)，在生命科學(xué)各領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，人Elisa試劑盒已邁出醫(yī)藥、臨床領(lǐng)域，步入農(nóng)業(yè)、漁業(yè)、畜牧業(yè)和食品加工業(yè)。低濃度的酶標(biāo)抗體極容易受到高溫、微生物、以及蛋白酶的影響而失活，嚴(yán)重影響產(chǎn)品的貨架期，過去通常將酶標(biāo)抗體凍干保存，然而這樣的保存，不僅由于在凍干的過程中會(huì)影響酶標(biāo)抗體的活性，人Elisa試劑盒而且在臨床應(yīng)用中頗為不便。適當(dāng)?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會(huì)對(duì)對(duì)酶標(biāo)抗體的活性起一定的保護(hù)作用，因此我們?cè)O(shè)計(jì)了一組保護(hù)劑用于保護(hù)酶標(biāo)抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標(biāo)抗體做對(duì)照，將經(jīng)保護(hù)的人Elisa試劑盒酶標(biāo)抗體及未保護(hù)的酶標(biāo)抗體置于37℃烘箱中放置6天，考察保護(hù)液對(duì)酶標(biāo)抗體的影響。