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大鼠Elisa試劑盒試驗詳細(xì)記錄是重點(diǎn)

更新時間：2015-03-02   點(diǎn)擊次數(shù)：1313次
 　　本大鼠Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠S100蛋白(S-100)水平。用純化的大鼠S100蛋白(S-100)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入S100蛋白(S-100)，再與HRP標(biāo)記的S100蛋白(S-100)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，大鼠Elisa試劑盒經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100蛋白(S-100)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠S100蛋白(S-100)濃度。
　　大鼠Elisa試劑盒操作程序
　　1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
　　2．將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。大鼠Elisa試劑盒處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
　　3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
　　4．大鼠Elisa試劑盒反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
　　5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
　　6．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1分鐘左右。
　　7．將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
　　8．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。
　　9．每孔0.1ml依次加入TMB工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）。
　　10．大鼠Elisa試劑盒用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
　　11．根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。
　　大鼠Elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知OTR濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將OTR和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中OTR的濃度呈比例關(guān)系。
　　大鼠Elisa試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測量鴨TNFα，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于大鼠Elisa試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。