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大鼠Elisa試劑盒使用雙單抗

更新時間：2014-12-26   點擊次數(shù)：1314次
     大鼠Elisa試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬生長激素(GH)水平。用純化的豬生長激素(GH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入生長激素(GH)，再與HRP標記的生長激素(GH)抗體結(jié)合，大鼠Elisa試劑盒形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長激素(GH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬生長激素(GH)濃度。
    大鼠Elisa試劑盒提供原倍標準品一支，分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，大鼠Elisa試劑盒然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。豬ELISA試劑盒小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
    現(xiàn)在市場上的大鼠Elisa試劑盒質(zhì)量參差不齊，各類生物公司扎堆，如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要，具體我們總結(jié)有以下幾點可供參考：
    一、特異性，大鼠Elisa試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分，抗體對有關(guān)，若抗體對中之一為多抗，另一個必須為單抗，建議使用雙單抗。
    二、靈敏度，靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力，用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標的量選擇合適的試劑盒，如果待檢指標量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，可選擇高敏的大鼠Elisa試劑盒。
    三、重復性，科學實驗講求重復性，一般大鼠Elisa試劑盒，其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應該控制在15%以內(nèi)。
    四、簡便性，試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下，實驗時間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎！這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標。
    五、經(jīng)濟性，進口分裝試劑盒因為省去不少物流和報關(guān)費用，與國外*試劑相比價格上有比較大的優(yōu)惠，大鼠Elisa試劑盒而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格，特別是48T等小包裝，目前很多客戶因為對品牌的信任度問題，主要還是選擇國外*，但是國內(nèi)進口分裝比較成熟的公司仍然是一個非常好的選擇！
    大鼠Elisa試劑盒訂單下了，收到貨到運用這段時間，也是要好好保存的，要特別注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，大鼠Elisa試劑盒在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色，樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，大鼠Elisa試劑盒一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾，血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，大鼠Elisa試劑盒如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下，冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可，大鼠Elisa試劑盒在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。